- 耿戈戈;张峰华;刘晓炎;樊雯婷;甘滔;
目的：明确极光激酶A(Aurora kinase A,AurkA）是否通过调控巨噬细胞源性泡沫细胞形成参与动脉粥样硬化发生发展。方法：从GEO数据库提取动脉粥样硬化小鼠主动脉基因表达谱数据（GSE 19286），选择特异性探针分析AurkA表达。选用8周龄普通饲料喂养的C57BL/6J健康雄性小鼠作为CC组（喂养普通饲料），将8周龄C57BL/6J背景的ApoE~(-/-)（Apolipoprotein E KO）健康雄性小鼠随机分为AN组（喂养普通饲料）和AH组（喂养21%脂肪，0.5%胆固醇的高脂饲料），喂养16周。收集外周血及主动脉、肝脏、脾脏等组织样本，检测血清总胆固醇（Total cholesterol,TC）、甘油三酯（Triglycerides,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平和主动脉大体油红染色确认动脉粥样硬化小鼠模型建模成功后，利用qPCR方法检测各组织AurkA mRNA表达。选用8周龄C57BL/6J背景的ApoE~(-/-)健康雄性小鼠，随机分为MC组（溶剂处理的高脂喂养的ApoE~(-/-)小鼠）和M组（AurkA抑制剂MLN8237处理的高脂喂养的ApoE~(-/-)小鼠），以同样方法高脂喂食16周构建动脉粥样硬化小鼠模型。在建模第12周开始M组给予小鼠20 mg·kg~(-1) MLN8237灌胃，每周2次，持续4周，MC组给予小鼠同等体积溶剂（10%2-羟丙基-β-环糊精和1%碳酸氢钠）处理。在建模16周后取外周血，检测血脂水平的同时，经流式细胞术检测外周血中髓性细胞占比；取主动脉经大体油红染色检测斑块总面积；取心脏制备主动脉根部切片经HE和油红染色后分析斑块面积以及斑块内脂质累积情况。基于Bloodspot数据库分析AurkA mRNA在各类血液细胞中的表达模式并构建细胞模型，使用8周龄C57BL/6J小鼠获取骨髓细胞悬液，加入10 ng·mL~(-1) M-CSF诱导成为骨髓源性巨噬细胞，重新铺板分为对照组（Con）、建模组（ox-LDL）以及AurkA抑制剂处理组（ox-LDL+TCS）。在建模组（ox-LDL）和AurkA抑制剂处理组（ox-LDL+TCS）细胞中加入100μg·mL~(-1)氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）构建泡沫细胞模型，同时给予ox-LDL+TCS组10 nM AurkA抑制剂TCS7010处理，给予ox-LDL组等量溶剂处理，48 h后利用油红染色检测泡沫细胞的脂质累积情况。结果：动脉粥样硬化小鼠主动脉基因表达谱数据显示，AurkA mRNA在病灶区的表达呈上升趋势。与CC组和AN组相比，AH组血清中的TC、TG以及LCL-C水平均升高（P<0.05），同时主动脉中存在大量粥样斑块沉积，提示造模成功。相较AN组，AH组小鼠肝脏、脾脏以及主动脉中的AurkA mRNA水平均有上调（P<0.05）。在给予MLN8237处理后，与MC组相比，M组的体重、血脂水平以及主动脉斑块总面积均无显著改变（P>0.05），但其主动脉根部的斑块面积以及斑块内的脂质累积均减少（P<0.05）。流式细胞术分析结果显示，M组小鼠外周血中的髓性细胞占比与MC组相当（P>0.05），但单核细胞占比降低（P<0.05）。AurkA在血液细胞中的表达谱分析显示，其在髓性细胞尤其是巨噬细胞中特异性高表达。在细胞实验中，与ox-LDL组相比，ox-LDL+TCS组的油红阳性面积占比下降（P<0.05），提示AurkA抑制剂能够下调巨噬细胞的脂质累积从而抑制泡沫细胞生成。结论：AurkA通过调控外周血中的单核细胞数量以及斑块中巨噬细胞源性泡沫细胞生成促进动脉粥样硬化发生发展，抑制AurkA活性可有效改善动脉粥样硬化进程。
2024年01期 v.44;No.234 1-8+58页 [查看摘要][在线阅读][下载 1447K] [下载次数：134 ] |[网刊下载次数：17 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：90 ] - 邢亚康;张丽梅;王恺迪;温亚娟;黎晓;帅萍;
目的：探讨染料木素磺酸钠（Genistein-3′-sodium sulfonate,GSS）对慢性脑缺血大鼠大脑皮层细胞焦亡的影响。方法：采用改良型双侧颈总动脉结扎法（Bilateral carotid artery ligation,2-VO）制备慢性脑缺血大鼠模型。将大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（2-VO+Vehicle）、治疗组（2-VO+GSS）3组，应用ELISA方法检测各组大鼠血清中IL-1β的活性变化；并应用Real time-PCR和Western Blot方法检测大鼠大脑皮层组织中IL-1β、NLRP3、Caspase-1、GSDMD的mRNA及（或）蛋白表达水平。结果：与假手术组相比，模型组大鼠外周血清中IL-1β含量显著升高（P=0.042 9）；与模型组比较，治疗组大鼠外周血清中IL-1β含量下降，但差异无统计学意义（P=0.073 3）。对各组大鼠大脑皮层组织中IL-1β的mRNA及蛋白表达水平观察发现，与假手术组比较，模型组大鼠大脑皮层IL-1β的mRNA表达水平及蛋白表达水平均升高，差异有统计学意义（P=0.025 5,P<0.000 1）；与模型组比较，治疗组大鼠大脑皮层IL-1β的mRNA表达水平及蛋白表达水平均下降，差异有统计学意义（P=0.020 0,P<0.000 1）。与假手术组比较，模型组大鼠大脑皮层中NLRP3、GSDMD和Caspase-1 P20的mRNA水平（P=0.044 3,P=0.022 9,P<0.000 1）及蛋白表达水平（P=0.000 3,P=0.000 7,P=0.074 1）均升高;与模型组比较，治疗组脑皮层中NLRP3、GSDMD和Caspase-1 P20的mRNA水平（P=0.001 2,P=0.004 4,P=0.005 8）及蛋白表达水平（P=0.008 4,P=0.026 8,P=0.038 5）均降低。结论：GSS可通过抑制神经细胞焦亡减轻慢性脑缺血损伤。
2024年01期 v.44;No.234 9-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 1192K] [下载次数：115 ] |[网刊下载次数：7 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：50 ] - 李烽;朱振兴;李志欣;邵银进;朱惠芳;
目的：探索“补肾填精”中药复方改善脑瘫儿运动发育落后的分子机制，为临床上采用中医药治疗脑瘫患儿提供科学依据。方法：对处于妊娠期16 d Wistar大鼠进行腹腔注射细菌脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）模拟宫内感染，并将孕鼠置于低氧环境下（92%氮气+8%氧气）处理2 h，以此建立妊娠期大鼠宫内感染合并缺氧模型。通过动物神经行为学测试，在子代大鼠中筛选获得幼年脑瘫大鼠。脑瘫模型幼鼠和正常幼鼠分别设置治疗组和对照组，共4个组别，每组动物10只；另取10只正常幼鼠不做任何处理，作为空白对照组。按1 g·（25 mL）~(-1) ddH_2O的质量体积比配制免煎颗粒药。通过灌胃给予治疗组大鼠“补肾填精”中药复方水剂，给药剂量为5 mL·kg~(-1)老鼠体重，每日1次，连续灌服15 d。分别于给药后第5 d、第10 d和第15 d对大鼠的运动能力进行观察和评估。给药15 d后将大鼠处死，大鼠眼眶采血，ELISA检测各组动物外周血中炎症因子的水平，取脑组织，对mTOR相关信号通路分子进行免疫印迹检测。结果：悬吊试验结果显示，与空白对照组相比，脑瘫对照组的悬吊时间明显缩短（P<0.001）；与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组悬吊时间明显延长（P<0.001）；而正常治疗组与正常对照组相比，悬吊时间差异无统计学意义（P=0.064）。斜坡实验结果显示，与空白对照组相比，脑瘫对照组转头时间明显延长，差异有统计学意义（P<0.001）；与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组转头时间明显缩短，差异有统计学意义（P<0.001）；而正常治疗组与正常对照组相比，转头时间差异无统计学意义（P=0.863）。对各组别大鼠的体重进行监测，与空白对照组及正常对照组相比，正常治疗组体重无明显差异（P>0.05）；与空白对照组相比，脑瘫治疗组体重明显减轻（P<0.001）；与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组体重明显增加（P=0.031）。ELISA检测各组动物外周血中炎症因子的水平发现，与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组外周血中促炎因子TNF-α和IL-1β显著下降（P<0.001），但对IL-6的水平影响不大（P>0.05），而抗炎因子IL-4和IL-10显著升高（P<0.001）。WB方法检测各组大鼠神经组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平发现，与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组PI3K表达增加，磷酸化AKT和mTOR表达增加，LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值降低，自噬相关蛋白p62表达增加（P<0.01）。结论：“补肾填精”中药复方可通过调控mTOR信号通路介导的神经细胞自噬，并抑制炎症的发生达到改善脑瘫幼年大鼠运动功能的效应。
2024年01期 v.44;No.234 15-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 1367K] [下载次数：105 ] |[网刊下载次数：9 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：19 ]
- 张文娟;李珂云;冯嘉禾;林乐迎;熊俊;秦静茹;胡衡;李珍妮;贺喆;曹镐禄;
目的：探讨钙敏感受体（Calcium sensitive receptors, CaSR）在血吸虫病肝纤维化中的作用。方法：采用BALB/c小鼠建立血吸虫病肝纤维化模型。通过HE和Masson染色观察小鼠肝组织病理学变化，免疫组织化学、RT-qPCR和Western blot技术分别检测肝组织中CaSR和纤维化相关指标表达，ALT和AST试剂盒检测肝组织氨基转移酶含量，天狼星红和VG染色技术观察CaSR抑制剂（Calhex231）对小鼠肝纤维化的影响。结果：HE染色结果显示，未感染组小鼠肝细胞排列整齐，感染组小鼠肝组织中出现大量虫卵且虫卵周围有胶原纤维沉积，形成虫卵肉芽肿，Masson染色结果显示，未感染组小鼠肝细胞排列整齐，肝组织未见明显胶原沉积，感染组小鼠肝组织大量破坏，出现大量假小叶且周围有大量胶原纤维化增生；与未感染组相比，感染组小鼠肝组织α-SMA、Collagen-Ⅰ和CaSR表达增加，ALT和AST含量增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；天狼星红染色结果显示，感染组小鼠肝组织结构已经严重破坏，且出现大量胶原纤维沉积；CaSR抑制剂干预组小鼠肝组织结构出现破坏，但尚有部分组织为完整结构；VG染色结果显示，感染组小鼠肝组织已呈现出大量粉红色，而CaSR抑制剂干预组小鼠肝组织呈现出部分粉红色，尚有部分完整组织结构。结论：CaSR可能在血吸虫病肝纤维化中发挥作用。
2024年01期 v.44;No.234 22-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 1326K] [下载次数：102 ] |[网刊下载次数：10 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：50 ] - 方霞;孙江云;袁丰华;
目的：评估双硫死亡相关LncRNA在肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）患者中作为预后指标的潜在价值。方法：从TCGA数据库中获取HCC的RNA-Seq和临床信息数据，从相关文献中获得10个双硫死亡相关基因，通过共表达分析获得双硫死亡相关LncRNA。然后利用单因素Cox回归、Lasso风险回归分析和多因素Cox回归构建基于双硫死亡相关LncRNA的预后模型，根据训练集的风险评分中位值将HCC样本划分高、低风险组，通过K-M生存曲线、ROC曲线、主成分分析（PCA）以及C-指数评估模型效果。此外，对高、低风险组差异基因进行GSEA富集分析，并对高、低风险组进行免疫功能差异分析和免疫治疗效果分析。结果：从TCGA-LIHC数据库筛选得到320个双硫死亡相关LncRNA，单因素Cox回归分析得到40个与患者预后相关的LncRNA(P<0.05),LASSO风险回归和多因素Cox回归分析构建了6个双硫死亡相关LncRNA的预后模型（ELFN1-AS1、AL049840.2、MKLN1-AS、CYTOR、AL161645.1和AC069307.1），且K-M生存曲线、ROC曲线、主成分分析（PCA）以及C-指数验证了该模型具有良好的预测能力。对高、低风险组差异基因进行GO和KEGG富集分析，GO富集分析显示，生物学过程主要富集在外部封装结构组织，细胞组分主要富集在含胶原的细胞外基质，分子功能主要富集在细胞外基质成分。KEGG主要富集在PI3K/AKT信号通路。此外，对高低风险组差异表达基因进行功能富集分析，发现高风险组主要富集在细胞外基质受体途径，而低风险组主要富集在药物代谢细胞色素p450途径。采用GSEABase包分析高、低风险组免疫功能之间的差异，结果显示高风险组抗原呈递细胞共刺激（APC＿CO＿stimulation）、趋化因子受体（CCR）、主要组织相容性复合体Ⅰ类呈递（MHC＿class＿Ⅰ）、副炎症和辅助性T细胞2(Th2)的表达高于低风险组，高风险组的TIDE评分高于低风险组。结论：基于TCGA数据库构建了具有良好预测性能的HCC预后模型，为进一步研究双硫死亡相关LncRNA在肝细胞癌中的作用提供了新思路。
2024年01期 v.44;No.234 27-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 1600K] [下载次数：231 ] |[网刊下载次数：9 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：29 ] - 郝永乐;邹仁哲;韩静雯;陈菲;唐建红;
肝脏作为人体内新陈代谢中心，参与了机体的营养代谢、血容量调节、免疫功能调节、内分泌调节、脂质和胆固醇稳态维持以及异生型化合物的分解等过程，是人体最重要的器官之一。肝脏也是机体中唯一具有强大再生能力的内部器官。肝脏再生过程受到细胞质钙离子（Ca~(2+)）、细胞核Ca~(2+)和线粒体内Ca~(2+)的影响。病毒感染、长期酗酒和长期使用药物等所导致的严重、慢性损伤会使肝脏再生能力失调，并导致肝瘢痕和肝硬化等。已有研究表明，肝脏细胞Ca~(2+)浓度参与调节肝脏的胆汁分泌、脂质代谢、细胞增殖和细胞凋亡等过程。肝脏再生过程中，肝细胞增殖受到Ca~(2+)动员激动剂胰岛素的影响，胰岛素通过影响细胞核Ca~(2+)参与调控肝细胞增殖；此外，线粒体Ca~(2+)通过抑制细胞凋亡调节肝细胞增殖。当慢性病毒性肝炎发生时，肝细胞膜通透性增强导致细胞质Ca~(2+)增多，病毒通过调节Ca~(2+)信号传导途径促进病毒自身复制。本综述阐述了肝细胞内Ca~(2+)信号与肝脏再生和不同肝脏疾病的联系。
2024年01期 v.44;No.234 35-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 1184K] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：12 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：32 ] - 虞梦娟;吴雄健;
非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis,NASH），又称代谢性脂肪性肝炎，是病理变化与酒精性肝炎相似但无过量饮酒史的临床综合征，好发于中年特别是超重肥胖个体。非酒精性脂肪性肝炎与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病、高脂血症等代谢紊乱关系密切，主要特征为肝细胞大泡性脂肪变伴肝细胞损伤和炎症，严重者可发展为肝硬化，但至今NASH尚无得到批准的治疗方案。在寻找有效的治疗方法时，解决代谢失调、炎症和抗纤维化的新策略不断涌现。法尼类X受体（Farnesoid X receptor,FXR）除了是胆汁酸代谢和肠肝循环的关键调节剂外，还参与调节代谢稳态，使其成为NASH中有吸引力的治疗靶点。本文综述了FXR激动剂对NASH治疗的研究进展。
2024年01期 v.44;No.234 42-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 1059K] [下载次数：352 ] |[网刊下载次数：10 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：26 ] - 付林超;熊辉;蓝萍;周云;
幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）是一种定植于胃中的革兰氏阴性菌，与消化性溃疡、萎缩性胃炎、胃腺癌和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病密切相关。近年来有文献指出Hp与非酒精性脂肪性肝病（Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD）存在相关性，由于NAFLD病因复杂，发病机制未明确，临床药物治疗仍在不断探索之中。若能明确Hp感染与NAFLD之间的相关性，这将为临床上治疗NAFLD提供新思路。本文对近年来Hp与NAFLD的相关性进行综述。
2024年01期 v.44;No.234 49-52页 [查看摘要][在线阅读][下载 1036K] [下载次数：87 ] |[网刊下载次数：10 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：26 ] - 叶根生;吴雄健;
失代偿是肝硬化患者疾病进展的标志。早期及时发现肝硬化从代偿期到失代偿期的阶段性转变，有助于及时对肝硬化患者进行干预治疗，进而显著改善肝硬化患者的预后并延长生存期。因此评估肝硬化失代偿风险的方法在肝硬化疾病的诊疗过程尤为重要。本文对目前关于肝硬化失代偿风险评估方法的相关研究进行综述，旨在帮助临床医师进一步提高对肝硬化失代偿风险评估方法的认识。
2024年01期 v.44;No.234 53-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 1083K] [下载次数：141 ] |[网刊下载次数：6 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：22 ]